خلاصه پروژه پايان نامه اي دانشجوي دکتراي پژوهش محور مرکز تحقيقات که در تاريخ 31 شهريورماه برگزار گرديد
304325.mp3
خلاصه پروژه پايان نامه اي دانشجوي دکتراي پژوهش محور مرکز تحقيقات که در تاريخ 31 شهريورماه برگزار گرديد
اين مطالعه با هدف "بررسي ويژگي و عملکرد آنتي باديهاي ضد RTL? در رده هاي سلولي سرطاني کبد و پستان" انجام شد.
امروزه استفاده از آنتي باديهاي درماني يک رويکرد شناخته شده براي درمان سرطان است.RTL? (Retrotransposon like?) آنتي ژني است که در سالهاي اخير به عنوان يک هدف درماني در سرطان، مورد توجه قرار گرفته است. گزارش هايي مبني بر افزايش بيان RTL? در تعدادي از سرطانها از جمله کارسينوم کبدي (HCC) و ملانوما منتشر شده است.
در اين مطالعه بر عليه ? قطعه پپتيدي متعلق به بخش خارج سلولي پروتئين RTL?، آنتي بادي هاي پلي کلونال توليد گرديد و ويژگي هاي آنها با استفاده از مطالعات بيوانفورماتيک، الايزا، وسترن بلات و ايمونوهيستوشيمي (بر روي بافت جفت) و فلوسايتومتري (بر روي رده هاي سلولي سرطانهاي کبد و پستان) مورد بررسي قرار گرفت. همچنين بيان RTL? در بافتهاي سرطاني کبد و پستان توسط تکنيک ايمونوهيستوشيمي و نيز ارتباط ميزان بيان RTL? با فاکتورهاي کلينيکوپاتولوژيک بيماران، بررسي گرديد. سپس وجود RTL? از نظر وجود mRNA، پروتئين و محل قرارگيري آن در سلول (localization) در ? رده ي سلول سرطاني پستان و کبد و به ترتيب با استفاده از تکنيکهاي RT-PCR، وسترن بلات و فلوسايتومتري بررسي شد. در مرحله بعد تاثير اين آنتي باديها و نيز کونژوگه آنتي بادي-داروي آنتي نئوپلاستيک (SN??)، در تکثير رده هاي سلول سرطاني ذکر شده، مورد بررسي قرار گرفت. همچنين ورود آنتي باديها به داخل سلول با استفاده از تست فلوسايتومتري بررسي شد. به علاوه ميزان بيان RTL? در سلول هاي مقاوم شده به داروي شيمي درماني (?-FU) نيز مورد مطالعه و بررسي قرار گرفت.
نتايج حاصل از اين پروژه نشان داد که آنتي بادي هاي توليد شده همگي داراي واکنش پذيري مناسبي با پپتيدهاي مربوطه در الايزا بودند. آنتي بادي ها درجات متفاوتي از واکنش پذيري را در سنجش هايي مانند وسترن بلات، فلوسايتومتري و ايمونوهيستوشيمي نشان دادند و بنابراين آنتي بادي با بهترين راکتيويتي در سنجش هاي بعدي استفاده شد. تمام آنتي باديهاي توليد شده، قادر به شناسايي مولکول RTL? در سلولهاي اندوتليال جفت (به عنوان بافت کنترل مثبت) در آزمون ايمونوهيستوشيمي بودند. در بخش بررسي بيان RTL? در بافتهاي سرطان پستان و کبد، الگوي مخلوطي از بيان RTL? هسته اي و سيتوپلاسمي در اکثر بافتهاي مورد بررسي مشاهده گرديد، با اين حال بيان هسته اي الگوي بيان غالب بود. سطح بيان RTL? هسته اي در بافتهاي سرطان پستان(BC) و هپاتوسل کارسينوما (HCC) بطور معني داري نسبت به بافت نرمال و غير سرطاني بيشتر بود. در بافتهاي BC، ارتباط آماري معني داري بين بيان RTL? هستهاي و درجه بافت شناسي و تهاجم عروقي يافت شد. در بافتهاي HCC، ارتباط معني داري بين بيان هسته اي و اندازه تومور، تهاجم به اعصاب اطراف تومور و تهاجم عروقي مشاهده گرديد. در بخش بررسي بيان اين مولکول در رده هاي سلول سرطاني، رونوشت اين مولکول در تمامي رده ها به جز HepG? ديده شد. در وسترن بلات نيز باند RTL? با وزن مولکولي حدود KD ??? در جفت طبيعي انسان ديده شد، اما در رده هاي سلولي سرطاني, علاوه بر باند KD ???، دو باند پروتئيني ديگر با وزن هاي حدود ?? و ?? کيلو دالتون نيز مشاهده شد. آزمون فلوسايتومتري نشان داد که همه رده هاي سلولي RTL? را با درجه متفاوتي در سطح خود بيان مي کنند. بيان سطح سلولي در مهاجم ترين رده سلولي مورد مطالعه يعني MDA-MB-???، در مقايسه با T-??D، SKBR? و MCF? که ويژگي تهاجمي کمتري دارند، سطوح بالاتري را نشان داد همچنين نتايج نشان داد که در سلول SKBR? )سلولي با بيان سطحي پايين) ميزان بالايي از بيان RTL? به صورت داخل سلولي ديده مي شود. نتايج تست تکثير نشان داد که هم آنتي بادي و هم ترکيب آنتي بادي-دارو، تاثير معني داري بر تکثير سلول هاي سرطاني ندارند و نتايج تست اينترناليزيشن نشان مي دهد که در زمان کوتاهي پس از ورود آنتي بادي به داخل سلول، مجددا RTL? به سطح سلول بر ميگردد. همچنين نتايج تست هاي مقاومت دارويي نشان داد که بيان اين مولکول در سلول مقاوم شده به دارو، نسبت به سلول تيمار نشده تفاوتي ندارد.
نتايج اين تحقيق براي اولين بار نشان داد که RTL? به طور قابل توجهي در بافتهاي سرطان سينه و کبد بيان مي شود. نتايج نشان دهنده پتانسيل استفاده از RTL? به عنوان مولکول هدف براي ايمونوتراپي براي بيماران مبتلا به سرطان پستان و کبد است.
نتايج حاصل از اين تحقيق بصورت ? مقاله در مجلات معتبر بين المللي Experimental and molecular pathology و Immunopharmacology and immunotoxicology چاپ شد. همچنين اين نتايج منجر به ثبت اختراع به شماره ?????? ??/الف گرديد.
تهيه کننده خبر: دکتر فاطمه فرجي
دکتراي تخصصي ايمونولوژي
امروزه استفاده از آنتي باديهاي درماني يک رويکرد شناخته شده براي درمان سرطان است.RTL? (Retrotransposon like?) آنتي ژني است که در سالهاي اخير به عنوان يک هدف درماني در سرطان، مورد توجه قرار گرفته است. گزارش هايي مبني بر افزايش بيان RTL? در تعدادي از سرطانها از جمله کارسينوم کبدي (HCC) و ملانوما منتشر شده است.
در اين مطالعه بر عليه ? قطعه پپتيدي متعلق به بخش خارج سلولي پروتئين RTL?، آنتي بادي هاي پلي کلونال توليد گرديد و ويژگي هاي آنها با استفاده از مطالعات بيوانفورماتيک، الايزا، وسترن بلات و ايمونوهيستوشيمي (بر روي بافت جفت) و فلوسايتومتري (بر روي رده هاي سلولي سرطانهاي کبد و پستان) مورد بررسي قرار گرفت. همچنين بيان RTL? در بافتهاي سرطاني کبد و پستان توسط تکنيک ايمونوهيستوشيمي و نيز ارتباط ميزان بيان RTL? با فاکتورهاي کلينيکوپاتولوژيک بيماران، بررسي گرديد. سپس وجود RTL? از نظر وجود mRNA، پروتئين و محل قرارگيري آن در سلول (localization) در ? رده ي سلول سرطاني پستان و کبد و به ترتيب با استفاده از تکنيکهاي RT-PCR، وسترن بلات و فلوسايتومتري بررسي شد. در مرحله بعد تاثير اين آنتي باديها و نيز کونژوگه آنتي بادي-داروي آنتي نئوپلاستيک (SN??)، در تکثير رده هاي سلول سرطاني ذکر شده، مورد بررسي قرار گرفت. همچنين ورود آنتي باديها به داخل سلول با استفاده از تست فلوسايتومتري بررسي شد. به علاوه ميزان بيان RTL? در سلول هاي مقاوم شده به داروي شيمي درماني (?-FU) نيز مورد مطالعه و بررسي قرار گرفت.
نتايج حاصل از اين پروژه نشان داد که آنتي بادي هاي توليد شده همگي داراي واکنش پذيري مناسبي با پپتيدهاي مربوطه در الايزا بودند. آنتي بادي ها درجات متفاوتي از واکنش پذيري را در سنجش هايي مانند وسترن بلات، فلوسايتومتري و ايمونوهيستوشيمي نشان دادند و بنابراين آنتي بادي با بهترين راکتيويتي در سنجش هاي بعدي استفاده شد. تمام آنتي باديهاي توليد شده، قادر به شناسايي مولکول RTL? در سلولهاي اندوتليال جفت (به عنوان بافت کنترل مثبت) در آزمون ايمونوهيستوشيمي بودند. در بخش بررسي بيان RTL? در بافتهاي سرطان پستان و کبد، الگوي مخلوطي از بيان RTL? هسته اي و سيتوپلاسمي در اکثر بافتهاي مورد بررسي مشاهده گرديد، با اين حال بيان هسته اي الگوي بيان غالب بود. سطح بيان RTL? هسته اي در بافتهاي سرطان پستان(BC) و هپاتوسل کارسينوما (HCC) بطور معني داري نسبت به بافت نرمال و غير سرطاني بيشتر بود. در بافتهاي BC، ارتباط آماري معني داري بين بيان RTL? هستهاي و درجه بافت شناسي و تهاجم عروقي يافت شد. در بافتهاي HCC، ارتباط معني داري بين بيان هسته اي و اندازه تومور، تهاجم به اعصاب اطراف تومور و تهاجم عروقي مشاهده گرديد. در بخش بررسي بيان اين مولکول در رده هاي سلول سرطاني، رونوشت اين مولکول در تمامي رده ها به جز HepG? ديده شد. در وسترن بلات نيز باند RTL? با وزن مولکولي حدود KD ??? در جفت طبيعي انسان ديده شد، اما در رده هاي سلولي سرطاني, علاوه بر باند KD ???، دو باند پروتئيني ديگر با وزن هاي حدود ?? و ?? کيلو دالتون نيز مشاهده شد. آزمون فلوسايتومتري نشان داد که همه رده هاي سلولي RTL? را با درجه متفاوتي در سطح خود بيان مي کنند. بيان سطح سلولي در مهاجم ترين رده سلولي مورد مطالعه يعني MDA-MB-???، در مقايسه با T-??D، SKBR? و MCF? که ويژگي تهاجمي کمتري دارند، سطوح بالاتري را نشان داد همچنين نتايج نشان داد که در سلول SKBR? )سلولي با بيان سطحي پايين) ميزان بالايي از بيان RTL? به صورت داخل سلولي ديده مي شود. نتايج تست تکثير نشان داد که هم آنتي بادي و هم ترکيب آنتي بادي-دارو، تاثير معني داري بر تکثير سلول هاي سرطاني ندارند و نتايج تست اينترناليزيشن نشان مي دهد که در زمان کوتاهي پس از ورود آنتي بادي به داخل سلول، مجددا RTL? به سطح سلول بر ميگردد. همچنين نتايج تست هاي مقاومت دارويي نشان داد که بيان اين مولکول در سلول مقاوم شده به دارو، نسبت به سلول تيمار نشده تفاوتي ندارد.
نتايج اين تحقيق براي اولين بار نشان داد که RTL? به طور قابل توجهي در بافتهاي سرطان سينه و کبد بيان مي شود. نتايج نشان دهنده پتانسيل استفاده از RTL? به عنوان مولکول هدف براي ايمونوتراپي براي بيماران مبتلا به سرطان پستان و کبد است.
نتايج حاصل از اين تحقيق بصورت ? مقاله در مجلات معتبر بين المللي Experimental and molecular pathology و Immunopharmacology and immunotoxicology چاپ شد. همچنين اين نتايج منجر به ثبت اختراع به شماره ?????? ??/الف گرديد.
تهيه کننده خبر: دکتر فاطمه فرجي
دکتراي تخصصي ايمونولوژي
.jpg){kind=small}
:
